詳細講解膠體金免疫層析技術檢測原理及方法應用

什么是膠體金免疫層析技術

膠體金免疫層析技術是以膠體金作為示蹤標志物，應用于抗原抗體反應中的一種新型免疫標記技術。膠體金是由氯金酸水溶液在還原劑作用下，聚合成特定大小的金顆粒，顆粒之間因靜電作用形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，也稱金溶膠。膠體金由于具有膠體穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)強吸附性和高電子密度等特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而可用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中。

膠體金免疫層析技術的原理

膠體金免疫層析技術就是以膠體金為顯色媒介，利用免疫學中抗原抗體能夠特異性結(jié)合原理，在層析過程中完成這一反應，從而達到檢測的目的。膠體金免疫層析技術的原理是樣品中目標物與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線（T線）上偶聯(lián)抗原的免疫反應，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中目標物進行定性檢測。

將特異的抗體或抗原以條帶狀固定在硝酸纖維素（NC）膜上的某一區(qū)域，該區(qū)域有控制線和顯示結(jié)果的測試線，當樣品加入膜一端（如加樣孔）時，借助毛細管作用向前移動，樣品沿著膜運動到達該區(qū)域后，樣品中相應的抗原或抗體與該抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，使該區(qū)域顯示一定的顏色，通過可目測的膠體金標記物得到直觀的顯色結(jié)果，而流離標記物則越過這一區(qū)域，達到自動分離的目的。該方法用肉眼即可判讀檢測結(jié)果，可實現(xiàn)目標物的快速檢測。膠體金免疫層析法就是利用膠體金本身的顯色特點結(jié)合免疫層析技術用來診斷特異性的待測物。

膠體金免疫層析技術的方法

膠體金免疫層析當下的檢測方法非常的多，有間接法、夾心法、雙抗體夾心法、競爭法以及捕獲法。

1、間接法是用膠體金來標記二抗，像是沒有標記的特異性與已知抗原結(jié)合，間接法經(jīng)常是用在檢測血清樣本中的病毒上；

2、雙抗夾心法就是用在檢測病原微生物性的大分子抗原，早早孕試紙就是用這個方法；

3、競爭法經(jīng)常用在濫用藥物、農(nóng)藥殘留食品添加劑等檢測上；

4、捕獲法是用在風疹病毒、艾滋病等檢測

非競爭性作用原理即雙抗體夾心法：

檢測試劑是一種與乳膠顆粒或膠體金屬(一般采用膠體金)相偶聯(lián)的待測抗原的特異性配體(即抗體Abl)，所謂特異性：就是某種抗體專一性的識別結(jié)合某種抗原決定簇。它被沉積在結(jié)合墊上。當樣品(尿、血漿、全血等)加到樣品墊后，由于毛細管作用，樣品迅速浸透結(jié)合墊，檢測試劑被溶解，并隨著樣品流沿膜條向前移動。若樣品中存在待測抗原，它就會和檢測試劑中的抗體結(jié)合形成Ag—Abl。隨后，樣品通過固化有捕獲試劑(一般是待測抗原的另一表位特異性抗體Ab2)的測試線(testline)區(qū)域，將待測抗原一檢測試劑復合物捕獲形成Abl—Ag—Ab2復合物。樣品繼續(xù)前移，通過固化有抗Abl抗體(二抗Ab3)的質(zhì)控線(control line)區(qū)域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2復合物。這種方式通常用于檢測帶有多個抗原位點的分析，如絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。

競爭性作用的原理：

檢測試劑仍是與乳膠顆粒或膠體金結(jié)合的抗體(Abl)，而捕獲試劑則是待測抗原或待測抗原的模擬物。若樣品中含有待測抗原，則樣品和檢測試劑形成復合物(Ag—Abl)，即樣品中的待測抗原將檢測試劑中的抗體完全飽和。隨后在通過已固化有捕獲試劑的區(qū)域時，不再發(fā)生反應，測試線處不顯色；樣品繼續(xù)前移。復合物(Ag—Abl)被已固化在質(zhì)控線處的抗Abl的抗體(二抗Ab2)所結(jié)合，形成Abl—Ag—Ab2復合物，使質(zhì)控線顯色。這種方式適用于檢測帶有單一抗原表位的小分子抗原，常用于違禁藥物的檢測等。

膠體金標記技術是繼三大標記技術（熒光抗體技術、放射免疫分析和酶免疫技術，即經(jīng)典的三大標記技術）之后，又一較為成熟且已得到廣泛應用的免疫標記技術。 膠體金檢測技術以其獨特的應用優(yōu)勢，該技術因其操作簡便、觀察直觀、靈敏度高、價格低廉等優(yōu)點在醫(yī)學、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)獸藥殘留生物學、生物芯片以及病原微生物檢測等領域發(fā)揮著重要作用。其穩(wěn)定性好、安全、簡便，且不需任何儀器設備等優(yōu)點，使其在多個領域得到廣泛應用。